Immunofixation

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L'immunofixation est une technique immunologique permettant de mettre en évidence et de préciser le typage d'une immunoglobuline monoclonale dans le sérum ou les urines d'un patient. Elle tend actuellement à supplanter l'immuno-électrophorèse. Elle présente un grand intérêt pour le diagnostic et le bilan de certaines hémopathies comme le myélome.

[modifier] Principe

C'est une méthode de détection par précipitation, c’est-à-dire que lorsque l'on met en contact l'antigène (Ag) soluble avec l'anticorps correspondant, il se produit un phénomène de précipitation, visible à l'œil nu ou avec un appareil.

L'immunofixation permet d'identifier des antigènes (des immunoglobulines monoclonales) dans un mélange, en fonction de leur mobilité électrophorétique. Pour permettre cette identification on utilise des anticorps spécifiques à ces Ag.

L'immunofixation permet notamment de détecter les immunoglobulines monoclonales présentent dans des maladies telles que le myélome ou la maladie de Waldenström.

[modifier] Technique

Elle consiste à déposer du plasma (ou de l'urine qui aura au préalable été concentrée) sur un gel. Après application d'un courant électrique qui permet la séparation des protéines en fonction de leur taille, des anticorps spécifiques de chaque type d'immunoglobuline sont déposés sur le gel. Il apparaît ainsi des bandes plus ou moins étroites sur le gel, au niveau où se situent les différentes immunoglobulines.

L’immunofixation, comme l'immunoélectrophorèse, se déroule en deux étapes :

La première étape est identique pour les deux techniques. Elle consiste à déposer les antigènes contenus dans le plasma ou les urines sur un gel, puis de séparer ces antigènes en fonction de leur mobilité électrophorétique en les faisant migrer sous l’effet d’un champ électrique. Cette migration dépend de la masse et de la charge de l'antigène. Une fois les Ag séparés, on peut passer à l'étape suivante.
La deuxième étape est fonction de la technique utilisée. L’immunofixation nécessite de faire migrer le sérum testé plusieurs fois. Pour cela les anticorps ne sont pas déposés dans une rigole, comme dans l'électrophorèse, mais sont ajoutés individuellement sur chaque piste de migration des différents Ag. La présence d’une immunoglobuline monoclonale se traduit par l’apparition d’une bande étroite après coloration des complexes précipités. Par exemple, s’il s’agit d’une IgG l, on observera une bande étroite, à la fois, sur la piste où a été déposé l’anti-g ainsi que sur celle où a été déposé l’anti-l .

[modifier] Avantages

L’immunofixation tend à supplanter l’immunoélectrophorèse car elle a l'avantage d'être :

plus rapide (délai de réponse en moins de trois heures) ;
un peu plus sensible, ainsi l'immunofixation peut révèler une Ig passée inaperçue à l'électrophorèse, notamment lorsqu'elle est présente en petite quantité (moins d'1 gramme/litre) ;
en partie automatisable et donc réalisable par un plus grand nombre de laboratoires ;
plus facile à lire et à interpreter.